生命科学

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SARS-CoV-2新型冠状病毒检测

门诊RT-PCR诊断样品制备

对疑似SARS-CoV-2的诊断检测正在全面展开。据柏林Charité 医院病毒学家Christian Drosten*所述,到目前为止,德国疫情的温和发展完全归功于这种实验室检测。因此,许多实验室现在需要可靠的设备来安全地进行样品制备,特别是在进行RT-PCR检测之前。

2019年nCoV RT-PCR检测样品制备的三个阶段

世卫组织已经为执行nCoV RT-PCR检测的实验室发布了相关指南文件。在2019年,要获得安全的检测结果,需要在取得鼻拭子或口咽拭子后,对样本进行彻底清洗。

利用生命科学部门的IKA实验室设备,可快速,可靠地完成制备样品的各个步骤。最重要的是,IKA设备易于操作。鉴于当前形势,每个人都可操作该设备,包括一些医疗机构的员工。当然,他们可能需要接受关于医疗诊断实验室测试方面的培训,并快速熟悉设备检测事宜。在实际执行SARS-CoV-2检测之前,首先需要完成样本制备三个阶段的所有操作。

  • 样品制备
    制备样本时,将口腔粘膜细胞离心、分离并混合,以形成细胞悬浮液。 在这里,就像在所有的分子生物学中一样,由于RNA会很快被酶(如RNAse)破坏,因此在制备样品的过程中需要使用带有无RNAse/DNAse过滤器移液器 。过滤器还能有效防止交叉污染。根据样品类型,所使用 移液器 也可以比WHO推荐的更大。IKA全新PETTE 系列产品可为用户提供人体工程学设计这一额外好处。因此,在日常测试中,频繁移液操作可以说是轻而易举的事。此外,在样品制备过程中,还需用到 离心机摇床

  • 细胞溶解
    细胞溶解后,病毒的外壳即被打开。在这里,安全移液是最为重要的事情。对于温度控制,建议使用带有1.5 ml附件或2 ml附件的高质量恒温混匀器,例如 IKA Matrix Orbital Delta F1.5 or F2.0

  • 提取与纯化
    对于提取与纯化工艺,需要使用固定量程的移液器,或在理想的情况下使用可调量程的移液器。因为世卫组织建议使用不同尺寸的移液器(2、10、200和1000µl)。然后再次离心已粉碎材料。例如,IKA G-L 离心机适用于该阶段的清洗和分离过程。

    实际测试只能在这三个准备阶段之后进行。为了测试,可能存在冠状病毒的RNA必须首先被反转录合成为cDNA,并在热循环器中复制可检测数量10^9的cDNA。繁殖是在所谓的“引物”(与病毒RNA相对应的DNA片段)的帮助下进行的,如果存在冠状病毒的RNA或cDNA,则启动繁殖过程。将实验室制备的冠状病毒遗传物质的引物添加到样本中,以确定冠状病毒遗传物质是否能附着在患者样本上,如果能附着在患者样本上,则为阳性;反之,则为阴性。

    检测 SARS-CoV-2 新型冠状病毒

    Step1_Covid
* Source: https://www.spiegel.de/wissenschaft/mensch/corona-krise-virologe-liefert-erste-erklaerungen-zu-niedrigen-todeszahlen-in-deutschland-a-c8fef5d1-9c8e-4e9d-b8cc-3f85c6b00282 [requested: March 25, 2020]

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