Ciencias de la vida

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Pruebas de detección de SARS-CoV-2

Preparación de muestras para diagnóstico ambulatorio mediante RT-PCR

Las pruebas diagnósticas para la detección de SARS-CoV-2 están en pleno apogeo. Según Christian Drosten*, virólogo en el hospital Charité de Berlín, la evolución moderada de la epidemia en Alemania hasta la fecha se debe íntegramente a esta prueba de laboratorio. Por consiguiente, muchos laboratorios necesitan actualmente aparatos fiables para la preparación segura de muestras, sobre todo antes de la realización de pruebas RT-PCR.

Tres fases de preparación de muestras para la prueba RT-PCR para 2019-nCoV

La OMS ha emitido directrices para los laboratorios encargados de procesar pruebas. Para obtener resultados fiables de las pruebas de 2019-nCoV tras un hisopo nasal u orofaríngeo se requiere una limpieza previa exhaustiva de la muestra.

Los equipos de laboratorio IKA para el sector de ciencias de la vida permiten realizar de forma fiable y rápida los distintos pasos de preparación de las muestras. Por encima de todo, los aparatos IKA pueden ser manejados por todo el mundo, incluidos aquellos empleados que necesiten recibir formación y familiarizarse rápidamente con la realización de pruebas de laboratorio diagnósticas a causa de la situación actual. Antes de poder realizar la prueba de SARS-CoV-2 propiamente dicha, son necesarias tres fases de preparación de la muestra.

  • Preparación de muestras
    Durante la preparación de las muestras, se centrifugan, aíslan y mezclan células de la mucosa oral para crear suspensiones celulares. Como ocurre en todos los procesos de biología molecular, para ello se requieren pipetas con filtros libres de ARNasa/ADNasa, ya que el ARN es destruido muy rápidamente por enzimas como la ARNasa. El filtro también previene eficazmente la contaminación cruzada. Dependiendo del tipo de muestra, también pueden utilizarse pipetas de mayor tamaño que las recomendadas por la OMS. La nueva serie PETTE de IKA ofrece la ventaja añadida de un diseño ergonómico. Esto facilita en gran medida el pipeteo durante las pruebas diarias. Además, también se utilizan centrífugas y agitadores.

  • Lisis
    A continuación se abren las envolturas de los virus. También en este paso, la seguridad del pipeteo es absolutamente esencial. Para el control de la temperatura se recomienda el uso de agitadores térmicos de alta calidad con plataformas de 1,5 ml o de 2 ml, como el IKA Matrix Orbital Delta F1.5 o F2.0 .

  • Purificación y extracción
    Para la purificación y extracción se requieren pipetas fijas o, idealmente, variables, ya que la OMS recomienda cuatro tamaños distintos (2, 10, 200 y 1000 µl). A continuación se centrifuga de nuevo el material fragmentado. La centrífuga IKA G-L midi, por ejemplo, está indicada para los procesos de lavado y separación en esta fase.

    Solo se puede realizar la prueba propiamente dicha una vez completadas estas tres fases preparatorias. Para la prueba, en primer lugar es necesario transcribir el ARN del coronavirus a ADNc y reproducirlo en un termociclador hasta obtener un número detectable de 10^9. La reproducción se lleva a cabo con ayuda de los denominados cebadores o primers (fragmentos de ADN que se corresponden con el ARN del virus), los cuales inician el proceso de reproducción si está presente ARN o ADNc del coronavirus. Los cebadores de material genético de coronavirus creado en laboratorio se añaden a la muestra para determinar si el material genético de coronavirus puede fijarse a la muestra del paciente (= positivo) o no (= negativo).

    Pruebas de detección de SARS-CoV-2

    Paso1_Covid
* Fuente: https://www.spiegel.de/wissenschaft/mensch/corona-krise-virologe-liefert-erste-erklaerungen-zu-niedrigen-todeszahlen-in-deutschland-a-c8fef5d1-9c8e-4e9d-b8cc-3f85c6b00282 [Consulta: 25 de marzo de 2020]

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